流式细胞仪是集激光设备、电子信息技术、光学测量技术、电子信息技术、细胞荧光技术、单克隆抗体技术于一体的新型高科技仪器。具有灵敏度高、重复性好、非特异性强、方法灵活、分析速度快等优点。

　　一、流式细胞仪的基本及主要应用

　　流式细胞术可以同时检查单个细胞的多种细胞参数。

　　1.内部参数： FSC显示体细胞的大小，粒度。从主要内参可以掌握体细胞的大小形状、细胞质的颗粒性质、黑色素的含水量等。

　　2、外参：对细胞的某一成分进行非特异性荧光标记后进行检测，包括DNA含量和水分含量、RNA水分含量、细胞表面和细胞内的各种抗原、体细胞功能特异性检测等，分析范围很广，没有特异性。流式细胞仪检测速度可达每秒十个、数百个、数千个细胞，被测细胞数量可达千余至数十万，使样本全面、准确相对较短的时间。结果。

　　二、单细胞悬液制备的样品采集和质量管理

　　用于流式细胞术分析的样本必须是单细胞悬液。

　　1.血液和脊髓是单细胞悬液，可以直接用染料进行分析。标本采集采用肝素抗凝，抗原定标染色需要6小时。时间过长会降低细胞特异性，影响分析结果。48小时后的标本采集无分析意义。一些实验使用大量细胞作为测试的另一半，必须提取被测体细胞成分。淋巴细胞分离液是东大整形常用的分离淋巴细胞，制成单细胞悬液。

　　2.固体组织样本采集用单细胞悬液的制备：取手术切除的新鲜组织异常部分，使用骨科镊子，将一块组织放在钢上，揉搓，用PBS缓冲液清洗一起。收集并洗涤单细胞悬液，调体细胞浓度至lxl06/ml，经150目聚酯膜过滤，吸滤，取沉淀加70%酒精固定，备用。需要注意的是，在网磨钢的过程中，用力要适度，用力过大会对细胞造成很大的损伤，产生大量的细胞碎片，影响分析。

   三、单细胞悬浮液莹光染色剂的质量管理

　　莹光染色剂对流式细胞剖析关联重特大，我科应用的荧光染料有：PE、FTTC、cychrome、PI等，实际操作时将标本采集和着色剂加微信好友试管婴儿底端，搅拌，遮光(明亮可导致莹光淬灭)，室内温度置放20分鐘，如室内温度过低危害染剂融合，可适度增加染色剂時间。血夜、脊髓标本采集染色剂后经溶血、清洗、固定不动全过程就能上机操作。