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一分钟了解流式细胞仪的原理

一分钟了解流式细胞仪的原理

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【概要描述】流式细胞仪(FCM)是20世纪80年代利用单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高新技术发展起来的先进仪器。已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学、血液学等领域的研究和临床常规工作。

一分钟了解流式细胞仪的原理

【概要描述】流式细胞仪(FCM)是20世纪80年代利用单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高新技术发展起来的先进仪器。已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学、血液学等领域的研究和临床常规工作。

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  流式细胞实验总结:内容包括流式细胞仪的流程、原理、各类样品操作、样品制备、同型对照的认识、不同情况下如何使用封闭剂等。这是我收集和修改了相当长一段时间的内容。

  流式细胞仪(FCM)是20世纪80年代利用单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高新技术发展起来的先进仪器。已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学、血液学等领域的研究和临床常规工作。其中,人白细胞表面标志物的检测可以快速、正确地诊断白血病和淋巴瘤,对淋巴细胞群和亚群进行分类,还可以分离纯化某一群或亚群的细胞。活细胞免疫荧光技术用于流式细胞仪检测标本的制备。染色后也可在荧光显微镜下观察。在一定的实验条件下,活细胞免疫荧光染色的特异性和灵敏度优于液滴固定。常规间接免疫荧光的结果。

  (一)原则

  活细胞表面有比较完整的抗原或受体。首先使用特异的鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应的抗原结合,然后使用荧光标记的二抗进行结合。根据测得的荧光强度和阳性百分率,可知相应抗原的密度和分布。

  应留意标本采集和实验试剂使用量非常少,不可加进试管婴儿内壁,避免标本采集和实验试剂不可以充足触碰上色。溶血必须要充足,沒有彻底融解的血细胞及残片的存有危害检验剖析。

  (一)流式细胞仪校验

  流式细胞仪在使用前甚至使用过程中都必须仔细调整,以确保工作的可靠性和至佳性。调试项目主要是测量区的激光强度、液体流速、光程等。

  激光强度:除了调整反射镜的角度来调整所需波长的激光输出外,还需要结合显示屏上的光谱曲线,使激光的强度输出至大化。

  液体流量:可通过操作台上的数字显示进行监控,并可调节气体压力以获得稳定的液体流量。

  测量区光路调整:这是调试工作的关键。需要保证测量区域内的液流、激光束、90°散射测量光电系统垂直正交,交点较小。这通常可以在使用标准荧光微球等进行校准期间完成。

  流式细胞仪中测量的量是一个相对值,因此在使用前或使用中需要对系统进行校准或校准,以便通过相对测量获得意义。

  因此,流式细胞仪的校准具有双重功能:仪器的准直调整和定量校准。标准样品应稳定,所形成的组分形状应尺寸相对均匀,呈球形,样品分散性能好,经济易得。

  常用标准荧光微球作为非生物标样,鸡红细胞作为生物标样。微球由树脂材料制成,或标记荧光素,或不标记荧光素。


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